Veelgestelde vragen over centrifugale filterapparaten
Q1. Het is noodzakelijk om eiwitten met verschillende molecuulgewichten te scheiden, dus hoeveel verschil moeten de molecuulgewichten van de eiwitten hebben?
A: De grootte van de twee eiwitten moet 10 keer of meer verschillen.
Q2. Kan centrifugerenalfilterapparaten worden gesteriliseerd en bestand tegen wassen met alkali?
A: Het kan worden gesteriliseerd met een waterige oplossing van 75 procent ethanol en het membraan is bestand tegen 0.1-0.5N alkalische wassing met natriumhydroxide.
Q3. Hoe om te gaan als het eiwit neerslaat tijdens de concentratie?
A: Als het eiwit te snel of te geconcentreerd wordt geconcentreerd, kan dit eiwitprecipitatie veroorzaken en mag de uiteindelijke concentratie van het eiwit na concentratie niet te hoog zijn; Eiwitten die gevoelig zijn voor concentratiesnelheid en de neiging hebben te precipiteren, voorgestelde verbeteringsmethode:
Verlaag de centrifugale snelheid
Gebruik een ultrafiltratiemembraan met een hoger molecuulgewicht
Blaas en zuig in de geconcentreerde buis en centrifugeer
Q4. Wat is de mogelijke reden waarom decentrifugale filterapparatenkan niet worden gecentrifugeerd?
A: U kunt ongeveer 20 procent waterige ethanoloplossing gebruiken voor de eerste centrifugatie als de ultrafiltratiebuis niet kan worden gecentrifugeerd, omdat het ultrafiltratiemembraan volledig droog is, het oppervlak van het membraan zwak hydrofoob is en de flux kan worden hersteld na infiltratie met een lage oppervlaktespanning oplosmiddel.
Q5. Correcte gebruiksmethoden en opslag van centrifugale filterapparaten
A: De centrifugale filterapparaten moeten vóór gebruik worden gecentrifugeerd met gezuiverd water om de integriteit ervan te verifiëren. Na elk gebruik moet het in een natte toestand worden bewaard om uitdroging van het membraan te voorkomen.
Q6. Hoe verwijderen de centrifugale filterapparaten endotoxine?
A: De centrifugale filterapparaten die we hebben geleverd, zijn niet behandeld met endotoxinen, en omdat endotoxinen wijdverbreid voorkomen in de natuur, kunnen monsters die endotoxinen nodig hebben vooraf worden gereinigd met 0.5N natriumhydroxide vóór het experiment en vervolgens worden gewassen met RO-water om het grootste deel van het endotoxine te verwijderen.
Q7. Wanneer het geconcentreerde eiwit wordt gebruikt voor stroomafwaartse analyse, blijkt dat er interferentie is, wat is de reden?
A: De centrifugale filterapparaten kunnen worden voorgewassen met bufferoplossing of gezuiverd water. Als de interferentie nog steeds bestaat, was dan met 0.1N natriumhydroxide en was daarna met gezuiverd water.
Q8. It blijkt dat er na concentratie geen doeleiwit in het concentraat aanwezig is. Wat zijn de mogelijke redenen?
A: 1) De beginconcentratie van het eiwit mag niet te laag zijn, als de concentratie te laag is, kan het membraan mogelijk niet worden vastgehouden.
2) Selecteer de juiste membraanporiegrootte. De centrifugale concentratie van de filterbuis behoort tot doodlopende filtratie en de poriegrootte van het membraan is over het algemeen minder dan 2 keer of meer dan het doeleiwit.
3) Kies de juiste centrifugale snelheid
4) Of het doeleiwit neerslaat
Q9. Passiveringsbehandeling van centrifugale filterapparaten
A: Passiveringsvoorbehandeling van het oppervlak van de centrifugale filterapparaten kan het adsorptieverlies van eiwitten op het membraanoppervlak verminderen, in de meeste gevallen kan voorbehandeling van de kolom voordat de verdunde eiwitoplossing wordt geconcentreerd het herstel verbeteren, omdat de oplossing de blootgestelde kan vullen lege eiwitadsorptieplaatsen op het membraan en oppervlak, de passiveringsmethode is om de kolom vooraf te weken met een hoog volume passiveringsoplossing gedurende meer dan 1 uur, de kolom grondig door te spoelen met gedestilleerd water en vervolgens de kolom eenmaal te centrifugeren met gedestilleerd water om de passiveringsoplossing die op het membraan achterblijft volledig te verwijderen, moet u ervoor zorgen dat het membraan na passivering niet opdroogt. Als u het wilt bewaren voor toekomstig gebruik, moet u steriel gedestilleerd water toevoegen om het membraan nat te houden. Neem contact op met onze ingenieurs voor gangbare passiveringsoplossingen.
Q10. Filtert het ultrafiltratiemembraan de moleculen hiërarchisch?
A: Generally speaking, if the dead-end filtration method is used, it is difficult to accurately remove small molecules among several large molecules by ultrafiltration method. This is because the membrane is a porous network structure, and its filtration mechanism is based on retention rather than passage, such as, the cut off rate of molecules larger than 100kd is >95 procent bij gebruik van een ultrafiltratiemembraan van 100 kd, maar moleculen die kleiner zijn dan de poriegrootte van het membraan gaan niet volledig vrij door het membraan. Het moleculaire retentiepercentage van 67 kd is meer dan 70 procent, en het eiwit van 43 kd is ook voor meer dan 40 procent afgesneden, de verschillende componenten in een gemengde oplossing passeren het membraan niet zo eenvoudig en gemakkelijk als een oplossing met één component. In de praktijk , als je twee macromoleculen wilt isoleren, moet het verschil in molecuulgewicht tussen hen acht keer of meer zijn.
Q11. Hoe effectief grote en kleine moleculen scheiden door middel van ultrafiltratie?
A: Vanwege de behoeften van het proces worden de onzuiverheden in de macromoleculen verwijderd, of de kleine moleculen worden verwijderd uit de macromoleculen, dit is normaal bij de productie. Het is zeer noodzakelijk om de juiste membraanporiegrootte, filtratiemethode en bedrijfsomstandigheden te kiezen. Over het algemeen kan een relatief ideale scheiding worden bereikt als de MWCO-specificatie van het membraan tussen de twee eiwitten wordt gekozen. Als de eiwitoplossing relatief verdund is, zal werken onder lage druk ook helpen om betere resultaten te bereiken. Kies tangentiële stroomfiltratie en voer meerdere diafiltratie uit om een beter scheidingseffect te krijgen.
