Een efficiënt en goedkoop proces voor de zuivering en ultrafiltratie van recombinante eiwitten die gist tot expressie brengen

Gistexpressie van exogene genen kan niet alleen recombinante eiwitten en peptiden, antilichamen en vaccins, cytokines, groeifactoren, hormonen en andere bioactieve stoffen produceren, maar kan ook worden gebruikt om industriële enzymen, functionele voedingsmiddelen en biologische materialen te produceren, die brede toepassingsmogelijkheden hebben .

 

Het gistexpressiesysteem omvat twee algemeen gebruikte expressiesystemen, namelijk het saccharomyces cerevisiae-expressiesysteem en het methanotrofe gistexpressiesysteem. Het methanolgistexpressiesysteem is momenteel het meest gebruikte gistexpressiesysteem, en Pichia is het meest gebruikte, dat methanol als koolstof en energie kan gebruiken. Daarnaast zijn er Hansen-gist, Sphaeroides enzovoort.

 

Ongeacht het soort gistexpressiesysteem, de stroomafwaartse scheidings- en zuiveringsprocessen zijn vergelijkbaar, en de specifieke processtroom neemt gistexpressie van recombinante eiwitten en polypeptidegeneesmiddelen als voorbeeld.

 

Guidling-microfiltratiemembraancassettes maken gebruik van een open stroomkanaal en een tangentiële stroomfiltratiemodus, die op hoge snelheid complexe voedingsvloeistof zoals gistfermentatievloeistof en E. coli-kraakvloeistof effectief kan verwerken, en lineaire amplificatie van kleine test- tot productieschaal kan garanderen. Compact modulair ontwerp, eenvoudige pijpleidingaansluiting, onafhankelijkheid en leesbaarheid van het systeem kunnen operators beschermen en biologische vervuiling voorkomen. En geen onderhouds- en reinigingsverificatie. Daarom is het zeer geschikt voor de klaringsstap van vroege stroomafwaartse verwerking.

 

Het hoofddoel van het UF/DF-proces is het verwijderen van onzuiverheden en het vervangen van buffers. Guidling ultrafiltratiemembraancassette heeft een goede homogeniteit van de membraanporiegrootte en sterke hydrofiliciteit, waardoor het membraan een hogere flux en lagere eiwitadsorptie kan krijgen, en een geoptimaliseerd stroomkanaalontwerp, met een kleinere drukval, gemakkelijke materiaaloverdracht en een aanzienlijk kortere filtratietijd. Bovendien is de productserie compleet en flexibel om te voldoen aan de behoeften van verschillende toepassingen van verschillende schaalgroottes. Daarom is het zeer geschikt voor de UF/DF-stap van de stroomafwaartse verwerking.

 

Het volgende is het toepassingsgeval van Guidling-membraancassettebij gistexpressie van recombinante eiwitten.

 

Verduidelijking van microfiltratie

We gebruikten {{0}}.11 vierkante meter membraancassette met poriën van 0,22 μm om 1,5 liter gistfermentatievloeistof (doeleiwitmolecuulgewicht 42-55 KD) te klaren door middel van microfiltratie. In het hele proces van microfiltratie werden de terugwinningssnelheid van het doeleiwit, de verandering van de troebelheid en de uitputting van de membraanflux onderzocht.

0-17min is het concentratieproces, 17-32min is het was- en filtratieproces. Tijdens het hele microfiltratieproces nam de TMP geleidelijk toe, de vloeistofinlaatsnelheid bleef onveranderd en de gemiddelde materiaalstroom was 45LMH.

De troebelheid van de vloeistof was 600NTU vóór microfiltratie en 8NTU na microfiltratie, en de troebelheid veranderde duidelijk.

De resultaten lieten zien dat de opbrengst aan doeleiwit > 90% was. Guidling Technology 0,22 μm membraancassette is stabiel en geschikt voor dit toepassingsscenario.

 

Ultrafiltratie concentratie

 

 

De resultaten toonden aan dat het doeleiwit volledig gevangen zat. Guidling Technology 10kd membraancassettes kunnen stabiel werken en zijn geschikt voor dit toepassingsscenario.

De meeste van de door gist tot expressie gebrachte recombinante eiwitten waren niet in hoge mate tot expressie gebracht. De troebelheid van de gefiltreerde vloeistof was duidelijk verminderd en de eiwitwinningssnelheid was hoger. Omdat de daaropvolgende chromatografische tijd te lang is, zal dit nadelige effecten op het eiwit veroorzaken. Om de chromatografische bemonsteringstijd te verkorten, kan één stap ultrafiltratieconcentratie worden toegevoegd en kan het doeleiwit snel na het monster worden geconcentreerd, wat kan het doel bereiken om tijd te besparen, het vulvolume te verminderen en zo de productiekosten te verlagen.

 

Guidling Technology microfiltratiemembraancassettes kunnen over het algemeen de troebelheid van de voedingsvloeistof terugbrengen tot minder dan 20NTU, waardoor volledig wordt voldaan aan de behoeften van daaropvolgende ultrafiltratie en chromatografie. Het ultrafiltratieherstelpercentage van ultrafiltratiemembraancassettes varieert afhankelijk van de verschillende materialen. Het algemene herstelpercentage kan oplopen tot 90-95%.

Guidling Technology nodigt u uit om testkits aan te vragen voor gerelateerde evaluatie.

 

Over Guidling

Guidling Technology is een nationale hightech onderneming die zich richt op biofarmaceutica, celcultuur, zuivering en concentratie van biogeneeskunde, diagnose en industriële vloeistoffen. We hebben met succes centrifugaalfilterapparaten, ultrafiltratie- en microfiltratiecassettes, virusfilters, TFF-systemen, dieptefilters, holle vezels, enz. ontwikkeld. Die volledig voldoen aan de toepassingsscenario's van biofarmaceutica, celcultuur, enzovoort. Onze membranen en membraanfilters worden veel toegepast bij het concentreren, extraheren en scheiden van voorfiltratie, microfiltratie, ultrafiltratie en nanofiltratie. Onze vele productlijnen, van kleine laboratoriumfiltratie voor eenmalig gebruik tot productiefiltratiesystemen, steriliteitstesten, fermentatie, celcultuur en meer, voldoen aan de behoeften van testen en productie. Guidling Technology kijkt ernaar uit om met u samen te werken!