Stroomafwaarts zuiveringsproces van vaccin tegen diarree bij varkens

Diarree is een van de drie belangrijkste ziekten die grote economische verliezen hebben veroorzaakt voor de varkensindustrie in China. Er zijn veel factoren die diarree bij varkens veroorzaken, en de virale factoren zijn de ernstigste. Varkens van alle leeftijden kunnen besmet raken, vooral speenvarkens, en het sterftecijfer na infectie kan oplopen tot meer dan 50%. Het varkens-epidemie-diarreevirus (PEDV) en het varkens-overdraagbare gastro-enteritisvirus (TGEV) zijn wijdverspreid in de wereld, en de twee virussen kunnen afzonderlijk of in combinatie worden geïnfecteerd. Momenteel zijn er geen specifieke medicijnen om PEDV en TGEV te behandelen, en de preventie en bestrijding van varkensdiarree bestaan ​​voornamelijk uit commerciële vaccins.

Traditionele vaccins tegen epidemische varkensdiarree omvatten voornamelijk een volledig virus-geïnactiveerd vaccin en een levend verzwakt vaccin. Klinisch worden vaak PEDV en TGEV tandem-geïnactiveerd vaccin of verzwakt vaccin, en PEDV, TGEV en porcine rotavirus (RV) drievoudig geïnactiveerd vaccin of verzwakt vaccin gebruikt, meestal PEDV en TGEV tandemvaccin.

Momenteel zijn er in China veel vaccins tegen varkensepidemische diarree.

Het productieproces van geïnactiveerde en verzwakte vaccins is vergelijkbaar en omvat voornamelijk vijf stappen: het kweken van pathogenen, het inactiveren of verzwakte pathogenen, de extractie en zuivering van pathogenen, de voorbereiding en verpakking van vaccins, en de kwaliteitscontrole van vaccins. Dit artikel introduceert voornamelijk de procedure voor het zuiveren van pathogenen.

Verduidelijking

Het doel van de verduidelijking is om de verwijdering van celresten en andere grote deeltjesaggregaten te garanderen. Bij de celkweekproductie van een verscheidenheid aan gif zijn er, naast het bevatten van een groot aantal virusdeeltjes, veel celweefselresten en metabolische producten en andere onzuiverheden, waardoor het gif in een troebele of halftroebele toestand verkeert, de directe Het gebruik van deze gifconcentratieoperatie zal het ultrafiltratiemembraan snel blokkeren en de concentratie van het gif niet voltooien, wat resulteert in het afval van het ultrafiltratiemembraan. Voordat het gif wordt geconcentreerd, moet het daarom eerst worden opgehelderd, wat meestal gebeurt door middel van centrifugatie op lage snelheid en membraanfiltratie. Opgemerkt moet worden dat bij gebruik van membraanscheidingstechnologie, omdat het membraanmateriaal vaak elektronegativiteit of hydrofobe groepen bevat, het noodzakelijk is om te onderzoeken of het materiaal van het membraan adsorptie heeft aan de virusdeeltjes.

Een efficiënte klaringsstap vereist een combinatie van een hoog verwijderingsvermogen voor vaste deeltjes en een hoge productopbrengst, gemakkelijke amplificatie en bescherming van later stroomafwaarts werkende eenheden. Momenteel wordt een diep filter gebruikt voor de zuiveringsoperatie.

Wanneer de kweekschaal echter te groot is, zal een groot aantal diepe filtermembranen nodig zijn, wat resulteert in een aanzienlijke stijging van de kosten van verbruiksartikelen. Tegelijkertijd zal de hoge dichtheid van de celcultuur de belasting van het diepe filtermembraan verminderen, wat resulteert in hogere kosten en overmatige productverdunning.

De microfiltratiemethode maakt hoofdzakelijk gebruik van tangentiële stroomfiltratie-apparaten, en de membraancomponenten zijn platte membraancassettes en holle vezels. Tangentiële stroomfiltratie (TFF) wordt aangedreven door het transmembraandrukverschil. Stoffen en onzuiverheden die kleiner zijn dan de poriegrootte van het membraan passeren het membraan, terwijl onzuiverheden zoals cellen met grotere deeltjes worden opgevangen. De poriegrootte van het membraan dat voor microfiltratie wordt gebruikt, is {{0}}.45/0.22μm. Microfiltratie met holle vezels met tangentiële stroom kan vloeistoffen met een hoog vaste stofgehalte direct verwerken, zoals celkweekmedium met hoge dichtheid, kan centrifugatie- en voorfiltratiestappen elimineren met minder stappen en eenvoudige bediening, membraan kan herhaaldelijk worden gebruikt door reiniging, waardoor investeringen in apparatuur en bediening worden verminderd kosten, in lijn met de eisen van modulaire geautomatiseerde productie.

Concentratie en zuivering

Na voorafgaande opheldering bevat het viruskweekmedium nog steeds een groot aantal onzuiverheden, waaronder defecte deeltjes, virusomhulsel, cytotoxine, medium, serum- en celfragmenten, enz. Als deze onzuiverheden in dieren worden geïnjecteerd, hebben ze niet alleen een invloed op de werkzaamheid van het vaccin, maar veroorzaken ook een sterke immuunrespons van de gastheer en leiden zelfs tot de dood van de gevaccineerde dieren. Daarom zijn concentratie en zuivering nodig om onzuiverheden zoals heteroproteïnen en celfragmenten te verwijderen, effectieve immuunreacties te versterken en te induceren, de hoeveelheid gebruikte vaccin te verminderen en bijwerkingen te verminderen.

Het principe van viruszuivering: het handhaven van de biologische activiteit en infectiviteit van het virus als uitgangspunt, het verwijderen van de virusonzuiverheden en het extraheren van de hoge zuiverheid van het virus.

Momenteel zijn ultrafiltratie de belangrijkste concentratie- en zuiveringsmethoden die bij grootschalige productie worden gebruikt.

Ultrafiltratiemethode, maakt voornamelijk gebruik van ultrafiltratie-apparaat met tangentiële stroom, holle vezelfiltratiesysteem en andere filtratieapparatuur. Onder normale omstandigheden kan de toepassing van de ultrafiltratiemethode ervoor zorgen dat het virus zich meer dan 100 keer concentreert, de verwijderingssnelheid van heteroproteïne tot 99%. Onder hen heeft holle vezelmembraanfiltratietechnologie de voordelen van milde en lage afschuifkracht, gemakkelijke verstopping, flexibele werking, lange levensduur en lage kosten, en gemakkelijke versterking, dus het wordt aanbevolen om holle vezels te kiezen voor virusconcentratie en -zuivering.

Wanneer de ultrafiltratiemethode wordt gebruikt voor concentratie en zuivering, is het erg belangrijk om de juiste membraanporiegrootte te selecteren, die direct de efficiëntie en kwaliteit van de concentratie bepaalt. Aan de ene kant is het noodzakelijk om de membraanopening te selecteren om de doelmoleculen effectief op te vangen om de opbrengst te garanderen, en aan de andere kant moet volledig rekening worden gehouden met het verwijderingseffect en de verwerkingssnelheid van heteroproteïnen. Daarom is het beste principe om het membraan te selecteren met de grootste poriegrootte die het doelmolecuul kan opvangen, en te proberen het filtermembraan te selecteren met een uniforme poriegrootteverdeling.

Porcine Epidemic diarree virus (PEDV) en overdraagbaar gastro-enteritis virus (TGEV) zijn beide coronavirussen, polymorfe bollen met omgekeerde puntachtige pieken, variërend in diameter van 60 tot 190 nm. Rotavirusziekte is een zoönotische ziekte waarbij het rotavirus (RV) een wielachtig uiterlijk heeft en een diameter van ongeveer 70 nm heeft. Deze drie virussen kunnen over het algemeen worden onderschept met behulp van 100-750kd-ultrafiltratiemembranen.

Guidling Technology is een nationale hightech onderneming die zich richt op biofarmaceutica, celcultuur, zuivering en concentratie van biogeneeskunde, diagnose en industriële vloeistoffen. We hebben met succes centrifugaalfilterapparaten, ultrafiltratie- en microfiltratiecassettes, virusfilters, TFF-systemen, dieptefilters, holle vezels, enz. ontwikkeld. Die volledig voldoen aan de toepassingsscenario's van biofarmaceutica, celcultuur, enzovoort. Onze membranen en membraanfilters worden veel toegepast bij het concentreren, extraheren en scheiden van voorfiltratie, microfiltratie, ultrafiltratie en nanofiltratie. Onze vele productlijnen, van kleine laboratoriumfiltratie voor eenmalig gebruik tot productiefiltratiesystemen, steriliteitstesten, fermentatie, celcultuur en meer, voldoen aan de behoeften van testen en productie. Guidling Technology kijkt ernaar uit om met u samen te werken!