Voorzorgsmaatregelen voor het gebruik van ultrafiltratiebuis
(1) Selecteer de juiste ultrafiltratiebuis. Over het algemeen mag het te behouden molecuulgewicht niet groter zijn dan 1 / 3 van het molecuulgewicht van het doeleiwit. Als het molecuulgewicht van het doeleiwit bijvoorbeeld 35 kDa is, kan de ultrafiltratiebuis met 10 kDa-molecuulgewicht worden geselecteerd. Als het molecuulgewicht van het doeleiwit ongeveer 10kd is, kan een ultrafiltratiebuis met een molecuulgewicht van 3KD worden gebruikt. Lees zorgvuldig de handleiding en let op de verschillende tolerantie van ultrafiltratiemembraan voor verschillende chemicaliën.
(2) De nieuw gekochte ultrafiltratie is droog. Voeg ultrapuur water toe voor gebruik en het water zal volledig door het membraan gaan. Koel het een paar minuten voor in een ijsbad of koelkast. Giet vervolgens het water uit en voeg de eiwitoplossing toe. De toegevoegde hoeveelheid mag niet hoger zijn dan de witte lijn aan de bovenkant van de buis. De bediening moet licht zijn. Voordat een eiwitoplossing wordt toegevoegd, moet de ultrafiltratiebuis op ijs worden ingebracht voor voorkoeling.
(3) Balans. Zowel massa als zwaartepunt moeten in balans zijn. Merk op dat de snelheid en versnelling niet te snel mogen zijn, anders wordt het ultrafiltratiemembraan direct beschadigd. Start centrifugale ultrafiltratie (centrifuge voorkoeling tot 4 graden). Nadat het toerental van verschillende centrifuges is omgezet in G, is het anders. Stel de versnelling van de centrifuge in op de laagste versnelling om de druk op het membraan te verminderen. Merk op dat u moet wachten tot de centrifuge de doelsnelheid bereikt voordat u de centrifuge verlaat, anders kunt u er niet in de eerste keer mee omgaan als er een probleem is met de centrifuge. De richting van het membraan en de roterende as moet volgens de instructies worden aangepast (in het geval van een onder een hoek draaiende centrifuge staat het membraan loodrecht op de as). In de praktijk is de snelheid over het algemeen lager dan die in de handleiding, wat de levensduur van de centrifugaalpijp kan verlengen.
(4) Wanneer het geconcentreerd is tot de resterende 1 ml, neem dan 50ul bufferoplossing en voeg 10ul toe om door te stromen om te zien of het blauw wordt, om te beoordelen of de ultrafiltratiebuis eiwit lekt. Als de buis lekt, giet dan de bovenste laag en stroom door de nieuwe buis en start ultrafiltratie. Om nauwkeurig te beoordelen of de buis lekt, centrifugeer je met 5 mg ml BSA gedurende 10 minuten, neem dan de stroom door, voer eiwitlijm of Bradford uit voor ruwe meting en blijf de resterende eiwitoplossing toevoegen voor concentratie (werk op ijs om te voorkomen dat het eiwit wordt verwarmd) totdat alle geconcentreerde oplossingen zijn toegevoegd. Let op of eiwitprecipitatie optreedt tijdens het centrifugeren, wat resulteert in pijpverstopping. Als neerslag optreedt, bepaal dan de specifieke oorzaak van neerslag, of de eiwitconcentratie te hoog is of de buffer ongeschikt is; De eerste kan worden opgelost door gelijktijdige ultrafiltratie met meerdere ultrafiltratiebuizen om de concentratie te verlagen. De laatste is om verschillende bufferoplossingen te veranderen totdat het eiwit niet neerslaat.
(5) De vorige stappen worden gebruikt om eiwitten te concentreren. Als u de buffer wilt veranderen, wanneer de totale eiwitoplossing is geconcentreerd tot ongeveer 1 ml, voegt u voorzichtig een nieuwe buffer toe (ultrafiltratie door 0,22um ultrafiltratiemembraan) en concentreert u vervolgens drie opeenvolgende keren tot ongeveer 1 ml. Het uiteindelijke volume van de laatste concentratie hangt af van de vereiste eiwitconcentratie, die over het algemeen niet meer dan 500ul is, of het kan worden geconcentreerd tot minder dan 200ul. Volgens de volumeconcentratie van minstens 10 keer per keer, kan het meer dan 1000 keer drie keer bereiken, wat in principe het doel kan bereiken om de buffer te veranderen.
