DEAE Zwakke anionenuitwisselingsmembraanchromatografie

DEAE Zwakke anionenuitwisselingsmembraanchromatografie - Productintroductie

 

1. Overzicht

DEAE zwakke anionenuitwisselingschromatografie is een zuiveringstechniek gebaseerd op verschillen in de ladingseigenschappen en ladingsdichtheid van verschillende biomoleculen. Omdat de meeste biomacromoleculen functionele groepen bevatten zoals carboxyl- of hydroxylgroepen, kunnen hun ladingskarakteristieken en grootte worden aangepast door de pH van de bufferoplossing te wijzigen. Nadat biomoleculen zich binden aan een tegengesteld geladen anion- of kationenuitwisselingsmedium, wordt scheiding bereikt door de ionsterkte of pH van de mobiele fase te veranderen. Moleculen met een zwakkere bindingsaffiniteit worden eerst geëlueerd, gevolgd door die met een sterkere bindingsaffiniteit, waardoor een effectieve scheiding wordt bereikt

 

2. Productvoordelen

2.1 Hoge efficiëntie: Bereikt een sterke binding bij stroomsnelheden die tot 40 keer hoger zijn dan bij hars-gebaseerde chromatografie. Vergeleken met traditionele gepakt-bedchromatografie verkort membraanchromatografie de totale procestijd ongeveer 30-40 keer.

2.2 Hoge bindingsefficiëntie: Membraanchromatografie vertoont een hoge bindingscapaciteit en een hoge stroomsnelheid bij een lage drukval, waardoor geladen biomoleculen in één enkele doorgang door de kolom kunnen worden opgevangen.

2.3 Schaalbaar en flexibel: de volledige serie membraanchromatografieproducten kan voldoen aan diverse behoeften op het gebied van de zuivering van biomacromoleculen en omvat alle stadia, van procesontwikkeling tot grootschalige productie op- schaal. Het structurele ontwerp van het capsule-type ondersteunt zowel eenmalig gebruik- als hergebruik na reiniging.

2.4 Verbeterde productiviteit: Het compacte ontwerp minimaliseert de voetafdruk van de faciliteit. Door het elimineren van kolompakking-, reinigings-, reinigingsvalidatie- en kolomopslagprocedures kan het systeem direct na bufferequilibratie worden gebruikt zonder kolompakking of opslag. De arbeidskosten kunnen tot 50% worden verlaagd.

 

3. Technische parameters

3.1 Structurele materialen

	laboratorium schaal	kleinschalig	pilot schaal	productie schaal
Membraanvolume	0,2 ml	5 ml	140 ml	5L
Membraanondersteuningsstructuur	Polypropyleen (PP)
Membraan behuizing	Polypropyleen (PP)
O-ring	Siliconen

3.2 Bedrijfskarakteristieken

	laboratorium schaal	kleinschalig	pilot schaal	Productieschaal
Membraanvolume	0,2 ml	5 ml	400 ml	5L
Aanbevolen stroomsnelheid	1-6 ml/min	25-150 ml/min	2-12L/min	25-150L/min
Maximale bedrijfstemperatuur	35 graden
Maximale werkdruk	3bar (25 graden)
Maximaal drukverschil	3bar (25 graden)
Bewaaromstandigheden	20% waterige ethanoloplossing

Figuur 1. Veranderingen in de laadcapaciteit van membraanchromatografie na meervoudig gebruik, gevolgd met BSA.

Daarnaast evalueerden we de verwijderingsefficiëntie van gastheerceleiwitten en nucleïnezuren met behulp van DEAE-membraanchromatografie. De resultaten zijn als volgt.

	DNA				HCP
	IgG-herstel	Inhoud (pg/mg IgG) door RT-PCR		Verwijderingsfactor	Inhoud (ng/mg IgG) door Elisa		Verwijderingsfactor
Loop	%	Vóór DEAE-membraan	Na DEAE-membraan	Logboek	Vóór DEAE-membraan	Na DEAE-membraan	Logboek
1	96.7	423	3.5	2.08	7.8	5	0.19
2	97.4	438	6	1.86	7.7	4.9	0.20
3	94.7	513	8	1.81	6.3	1.9	0.52
4	95	32	2	1.20	6	4.2	0.15
5	96.3	45	6	0.88	8.1	5.2	0.19
6	96.5	158	3	1.72	8.7	6.2	0.15
7	96.4	267	2	2.13	9.8	7.1	0.14
8	96.8	298	7	1.63	9.4	8.2	0.06
9	97.1	746	5	2.17	4.3	2.6	0.22
10	96.6	39	2	1.29	4.4	1.7	0.41

Tabel 1. Verwijderingspercentages van DNA en gastheerceleiwitten uit CHO-tot expressie gebracht IgG met behulp van DEAE-membraanchromatografie.

Een reeks experimenten toonde aan dat Q-membraanchromatografie effectief onzuiverheden kan verwijderen, terwijl een hoge terugwinningssnelheid van het doel-IgG behouden blijft.

Daarnaast hebben we Gudiling-membraanchromatografie vergeleken met geïmporteerde merken en de gegevens over de laadcapaciteit zijn als volgt.

Figuur 2. Laadprestaties van verschillende eiwitten op onze membraanchromatografie en producten van concurrenten

Uit de algehele evaluatie blijkt dat onze laadcapaciteit vergelijkbaar is met die van geïmporteerde producten.

Figuur 3. Prestaties van DEAE-membraanchromatografiemodule bij het testen van collageeneiwitten

Met behulp van de DEAE-membraanchromatografiemodule toonden de validatieresultaten aan dat de meeste doelcollageeneiwitten konden worden opgevangen en geëlueerd met behulp van 135 mM NaCl.

Door testen onder verschillende elutieomstandigheden hebben we ontdekt dat membraanchromatografie en agarosegelchromatografie vergelijkbaar elutiegedrag vertonen, waarbij de eiwitzuiverheid aanzienlijk varieert onder verschillende zoutconcentraties. Bij praktisch onderzoek en ontwikkeling en productie is het noodzakelijk om de optimale evenwichtselutieomstandigheden kwantitatief te bepalen om doeleiwitten met een hoge- zuiverheid te verkrijgen.

 

4. Klassieke toepassingsgevallen

Verwijdering van DNA, virussen, gastheerceleiwitten en endotoxinen

Vangst van plasmiden, virussen, nucleïnezuren en eiwitten, evenals zuivering van oligonucleotiden

 

5. Operationele werkstroom

5.1: Voorbereiding en montage van apparatuur

5.1.1 De membraanchromatografiemodule moet op het AKTA-chromatografiesysteem worden geïnstalleerd op een manier die vergelijkbaar is met gepakte harskolommen, waarbij ervoor wordt gezorgd dat de stroomrichting in lijn ligt met de pijlen en de inlaatrichting. Sluit aan met behulp van Luer-connectoren of klemfittingen.

5.1.2 Stel het inlaatdebiet in op 5–10 MV/min en gebruik een evenwichtsbuffer om lucht te zuiveren. Ga door met spoelen totdat er geen luchtbellen meer te zien zijn bij de uitlaat en sluit vervolgens de permeaatuitlaat aan op het chromatografiesysteem

5.2:Behandeling vóór- gebruik

5.2.1: Stel het inlaatdebiet in op 5–10 MV/min en voer een voor-behandeling uit met 0,5 M NaOH voor meer dan 5 MV om ervoor te zorgen dat het membraan een evenwicht bereikt.

5.2.2: Bij dezelfde stroomsnelheid verder voor-behandelen met evenwichtsbuffer (1× PBS) gedurende meer dan 5 MV om ervoor te zorgen dat het membraan evenwicht bereikt.

5.3 Chromatografie proces

5.3.1

Stel het inlaatdebiet in op 5–10 MV/min en voor-behandel met een evenwichtsbuffer van meer dan 5 MV totdat het membraan een evenwicht bereikt.

5.3.2

Nadat het monster vooraf- is gefilterd door een filter van 0,22 μm, laadt u het monster totdat het laden is voltooid of de laadcapaciteit van de chromatografie is bereikt.

5.3.3

Was met equilibratiebuffer gedurende meer dan 10 MV totdat de UV-absorptie afneemt tot het basisniveau.

5.3.4

Gebruik gradiëntelutie of lineaire elutie volgens het procesontwerp en verzamel indien nodig monsters in fracties.

5.4,CIP-behandeling na-gebruik – CIP van membraanchromatografie-apparaat

5.4.1

Stel het inlaatdebiet in op 5–10 MV/min en voer een reiniging-in-place (CIP)-behandeling uit met 0,5 M NaOH voor meer dan 10 MV totdat de UV-absorptie onder de basislijn daalt.

5.4.2

Schakel na 30 minuten circulerend wassen over op wassen met water totdat de pH tussen 7–8 ligt en ga vervolgens door met reinigen met 20% ethanol totdat de geleidbaarheid vrijwel constant blijft.

5.5, opslag van membraanchromatografie:

Na gebruik en voltooiing van CIP kan de membraanmodule worden verwijderd en opgeslagen door deze in 20% ethanol te laten weken, of online bij kamertemperatuur worden bewaard in een 20% ethanoloplossing. De 20% ethanoloplossing moet periodiek worden geïnspecteerd en vervangen.

 

6.Bestelinformatie

DEAE--type capsulefilter met zwakke anionenuitwisselingsmembraanchromatografie

	Laboratorium-schaal	kleinschalig	Pilotschaal	Productieschaal
Productmodel	IEXD0002ES	IEXD0050ES	IEXD0400ES	IEXD5000ES
Membraanvolume	0,2 ml	5 ml	400 ml	5L

Populaire tags: deae zwakke anionenuitwisselingsmembraanchromatografie, China, leveranciers, fabrikanten, fabriek, groothandel, bulk, op voorraad, gratis monster